· polyacrylamideဂျယ်ကို acrylamide monomer၊ polymerization စတင်သည့်ပစ္စည်း၊ ဓာတ်ကူပစ္စည်း၊ နှင့် ဆားနှင့် ကြားခံအရောအနှော၏ ညာဘက်ကို ပေါင်းစပ်ရပါမည်။
· acrylamideနှင့် BIS (N, N'-methylene double acrylamide) သည် မိုနိုမာပုံစံ ဂျယ်မက်ထရစ်ဖြစ်သည်။
· ammonium persulfate သည် ကော်ပိုလီမာပြုလုပ်ခြင်း လုပ်ငန်းစဉ်ကို စတင်သည်။ကော်၏ဖော်မြူလာသည်ရေထဲတွင်ပြင်ဆင်ထားသော 10% ammonium persulfate ဖြေရှင်းချက်လိုအပ်သည်။အချက်အလက်အများစုသည် တက်ကြွစွာအသုံးပြုရန် လိုအပ်ကြောင်း ညွှန်ပြသည်။သို့သော် 10% ဖြေရှင်းချက်ကို 4 ℃ တွင် လှုပ်ရှားမှု သိသိသာသာ ဆုံးရှုံးခြင်းမရှိဘဲ ရက်သတ္တပတ်အတော်ကြာ ထားနိုင်သည်။၁၀ မီလီလီတာအထိ ကော်ပြီး ပေါင်းလို့မရတဲ့အခါ စွန့်ပစ်လိုက်ပါ။
အကြံပြုချက်- ရာခိုင်နှုန်းacrylamidesequencing ကော်နဲ့ ပရိုတင်းကော် မတူပါဘူး။ကြိုတင်လုပ်ထားသော acrylamide- BIS ဖြေရှင်းချက်ကို အသုံးပြုပါက မှန်ကန်သောပုလင်းကို ရရှိရန် သေချာပါစေ။
· TEMED (N, N, N', N' - tetramethyl ethylenediamine) သည် အညိုရောင်ပုလင်းထဲတွင် ရေခဲသေတ္တာထဲတွင် ထည့်ထားသော ဓာတ်ကူပစ္စည်းဖြစ်သည်။မလောင်းခင်မှာ ကော်ထည့်ပါ။
· electrophoresis တွင်အသုံးပြုသော polyacrylamide electrophoresis ဖန်များကို တစ်ကြိမ်စီမတိုင်မီနှင့်အပြီးတွင် ဆေးကြောသင့်သည်။Electrophoresis ပြီးနောက် ဆပ်ပြာရည်ပူပူဖြင့် ပျော့ပျောင်းသောစုတ်တံနှင့် အဝတ်စဖြင့် ဆေးကြောပါ၊ ပေါင်းခံရေဖြင့် ဆေးကြောပြီး ခြောက်အောင်ထားပါ။
· အစိုဓာတ်နှင့် ဖုန်မှုန့်များသည် ဆွန်းပေါ်လီမာဖြင့် ဖြစ်စေနိုင်သည်။Electrophoresis မလုပ်မီ၊ ဖန်ပြားကို ဖန်သားသန့်စင်ဆေးဖြင့် သန့်စင်ပြီး နူးညံ့သော စုတ်တံဖြင့် သုတ်ပါ။ပေါင်းခံရေဖြင့် ဆေးကြောပြီး စက္ကူသုတ်ကာ အခြောက်ခံပါ။စက္ကူမသုတ်မီ 70% Ethanol ဖြင့် ဆေးကြောခြင်းသည် သန့်ရှင်းပြီး အခြောက်ခံမှုကို မြန်ဆန်စေသည်။acrylamide နမူနာများကို ဆက်တိုက်ထည့်ပါ- BIS၊ ရေ၊ ကြားခံဖြေရှင်းချက်၊ ammonium persulfate၊ TEMED။ကောင်းစွာလှုပ်ခါပြီး ချက်ချင်းလောင်းပါ။
ပေါ်လီမာမပြုလုပ်မီ polyacrylamide ကို ချေဖျက်ရန် မလိုအပ်ပါ။(Acrylamide သည် အောက်ဆီဂျင်ပိုလီမာဖြစ်ခြင်းကို ဟန့်တားသောကြောင့် ပူဖောင်းများကို ဖယ်ရှားရန် လေဟာနယ်တွင် ထားရှိလေ့ရှိသည်။)
အလျားလိုက်ကော်ပွိုင့်နမူနာအကြံပြုချက်များ။
· ပိုမိုရှင်းလင်းစွာမြင်နိုင်ရန် နမူနာအပေါက်အချို့ပြုလုပ်ရန် အောက်ခြေအကွက်၊ အနက်ရောင်နောက်ခံတွင် အနက်ရောင်စက္ကူတစ်ရွက်ကို ထည့်ပါ။
· ကော်လွိုင်အပေါ်တွင် ကြားခံဖြည့်ထားသော ကော်ဗူး။
· အစွန်းတွင် အလင်းရှိပါက မီးကိုဖွင့်ပါ၊ အလင်းသည် ကော်လွိုက်ထွန်းတောက်ပါစေ။နမူနာကို pipette ထဲသို့ဆွဲပါ။
· အလိုအလျောက်ပိုက်ပိုက်စက်ကို အသုံးပြုခြင်း။
· နမူနာပေါ်ရှိ အမှတ်အများစုတွင် 10-200 mu 1 အရည်ရွေ့လျားမှုအမှတ်ကို အသုံးပြုနိုင်သည်။အလွန်သေးငယ်သောနမူနာအပေါက်များ (10μ1အောက်) အတွက် ကော် sequencing အတွက်သုံးသော ရှည်လျားသောပိုက်ခေါင်းခေါင်းသည် ပိုအဆင်ပြေပါသည်။
· နမူနာတွင် နှစ်မြုပ်ရုံမျှဖြင့် ပိုက်ပိုက်ဖြင့် ဖြည်းညှင်းစွာ လှုပ်ရှားနေသော အရည်များကို ရှူသွင်းပါ။နမူနာသည် glycerin နှင့် စေးကပ်နေပုံပေါ်နိုင်ပြီး လျင်မြန်စွာစုပ်ထုတ်ခြင်းသည် ပိုက်ခေါင်းခေါင်းထဲသို့ လေပူဖောင်းများကို ဆွဲငင်နိုင်သည်။
· ပိုက်ခေါင်းကို ရှူသွင်းပြီးနောက် နမူနာများသည် ပိုက်၏အစွန်းတွင် အရည်ခေါင်းကို ညင်သာစွာ ရွေ့လျားပေးမည် သို့မဟုတ် သုတ်ထားသော စက္ကူအစက်အစက်များ၏ အပြင်ဘက်တွင် အရည်များကို စုပ်ယူပါ။နမူနာကို မစို့မိစေရန် သတိထားပါ။
နမူနာကို နမူနာအပေါက်ထဲသို့ ထည့်ပါ။
· အနည်းငယ်ဖိအားကိုထိန်းထားရန် ပိုက်ပိုက်စက်၊ နမူနာများသည် လျှံနေသောအရည်ခေါင်းကို အနည်းငယ်ရွေ့သွားအောင်ပြုလုပ်ပါ။
· ကြားခံထဲသို့ထည့်သွင်းထားသောပိုက်ပိုက်ခေါင်းသည် အစက်အပြောက်ပေါက်များထက် အနည်းငယ်မြင့်ပြီး အပြုသဘောဆောင်သောဖိအားကို ထိန်းသိမ်းပါ။pipette ၏ ထိပ်ဖျားကို အပေါက်ငယ်တစ်ခုထဲသို့ ထည့်နိုင်သည်။
· နမူနာများကို ဖြည်းညှင်းစွာနှင့် မှန်မှန်ထုတ်ပါ။ပိုက်ဆက်အစွန်အဖျားကို အမှတ်နမူနာအပေါက်၏အထက်တွင် ထားရှိထားပြီး နမူနာအပေါက်ထဲသို့ နစ်သွားမည်ဖြစ်သည်။နမူနာအပေါက်ကို တွန်းထည့်မည့်အစား နမူနာအပေါက်ကို နစ်သွားပါစေ။
· နမူနာအရည်၏နောက်ဆုံးတစ်စက်ကို တစ်ကြိမ်လျှင် အရည်သည် ဒုတိယခြေထောက်သို့ ရွေ့သွားမည်ဖြစ်ပြီး အရည်ကို ဖြည်းဖြည်းချင်းမြှင့်ကာ ကြားခံမှ ရွေ့သွားမည်ဖြစ်သည်။
ဒေါင်လိုက်ကော်နမူနာကိုဘယ်လိုလုပ်မလဲ။
· ဒေါင်လိုက်ကော်ပွိုင့်နမူနာအပေါက်များကို ဖန်နှစ်ပိုင်းကြားတွင် ဖွဲ့စည်းထားသည်။အလွန်ပါးလွှာသောကော်ဖြင့် ပိုက်ခေါင်းကို ဖန်ပြားနှစ်ခုကြားတွင်ပင် ထည့်သွင်း၍မရပါ။Glycerin ကို ကြည့်ပါ။နမူနာအပေါက်ပေါ်တွင် ပိုက်ခေါင်းခေါင်းကို ထားကာ နမူနာအပေါက်ထဲသို့ နစ်သွားမည်ဖြစ်သည်။
· ပွိုင့်နမူနာမလုပ်မီ၊ ဒေါင်လိုက်ပွိုင့်တင်ထားရန် သေချာစေကာမူ polypropylene acyl gel နမူနာအပေါက်အား ဆေးကြောသန့်စင်ပါ။နမူနာအပေါက်၏အောက်ခြေတွင် ပေါ်လာနိုင်သော ပေါလီမာမပြုလုပ်ထားသော acrylamide နှင့် ရေများကို ဆေးကြောပါ။ရေသည် နမူနာအပေါက်ကို သိသိသာသာ သေးငယ်သွားစေနိုင်သည်။25ml သို့မဟုတ် 50ml ဆေးထိုးဆေးနှင့် 18-gauge အပ်တစ်ချောင်းကို အသုံးပြုပါ။electrophoresis ကြားခံကို လောင်းပြီး နမူနာအပေါက်ကို ဂရုတစိုက် ဆေးကြောပါ။
· နမူနာအပေါက်ကို မြင်ရန် ခက်ခဲသော်လည်း အတူတူပင်၊ ကျန်သည် လွယ်ကူသည်။အပေါက်များ ပိုများနေပါက နမူနာကြားခံကို ဘရိုမိုဖီနောအပြာဖြင့် စမ်းသပ်နိုင်သည်။
စာတိုက်အချိန်- မတ်လ ၃၁-၂၀၂၃